Расправление гистологических срезов

Гистология – важнейший раздел в направлении биологии и медицины, изучающий особенности жизнедеятельности тканей живых организмов. Для изучения изменений, происходящих в тканях необходимы качественные гистологические срезы. Каждый этап приготовления этих препаратов очень важен. От качества выполнения той или иной задачи на пути к получению образца, зависит информативность изготовленного материала.

Одним из сложнейших моментов можно назвать расправление гистологических срезов. Ведь для того чтобы срезы можно было наклеить на предметное стекло и продолжить их подготовку к изучению необходимо получить расправленные, пригодные образцы.

В практике приготовления гистологических препаратов известно несколько вариантов методов расправления и наклеивания образцов.

Самыми распространенными вариациями расправления гистологических срезов являются:

• Расправление при помощи теплой воды;
• Расправление на водяной бане;
• Влажная методика расправления;
• Сухой метод разглаживания срезов.

Далее, рассмотрим несколько самых распространенных видов расправления гистологических срезов.

Расправление срезов – практика

Для расправления гистологических препаратов нередко используется теплая вода. Перед тем, как срезы перенести на предметное стекло для наклеивания, их отправляют в теплую воду. В то время пока срезы расправляются под воздействием теплой жидкости, подготавливается стекло для размещения среза. Чаще всего для приклеивания срезов используется сочетание белка с глицерином.

Приготовление раствора

Для раствора необходимо свежее куриное яйцо, глицерин. Глицерина необходимо по объему ровно столько, сколько имеется чистого объема белка. Из указанных продуктов взбивают однородный микс, который впоследствии тщательно процеживают через гофрированный бумажный фильтр. Готовую смесь переливают в чистый флакон. Для того чтобы предотвратить процесс гниения в полученную субстанцию добавляют 2-3 мелких (1:100) кусочка формалина или тимола.

Емкость, в которой планируется хранить указанный продукт необходимо плотно закрыть. В таком случае приготовленный раствор будет храниться достаточно продолжительное время. Готовый раствор наносится при помощи специальной палочки на предметное стекло и равномерно разравнивается. Следующим этапом является установка предметного стекла в емкость с теплой водой, в которой расправляются срезы. В таком случае предметное стекло устанавливается под наклоном. Это требуется делать так, чтобы стекло было установлено под плавающими срезами. Далее, необходимо при помощи специальных инструментов (кисточки и иглы для препарирования) аккуратно натянуть образцы на стекло и распределить их в равномерном правильном положении.

Метод водяной бани

Для тех же самых целей, которые описаны выше может использоваться такой инструмент, как водяная баня. Удобство применения этого устройства заключается в том, что при его помощи можно создать оптимальную температуру для расправления материала, и поддерживать нагрев получится нужное количество времени. Стоит также подчеркнуть, что температурный режим может сохраняться в течение всего рабочего дня. При помощи водяной бани также можно осуществлять нагрев препаратов для последующей обработки. Как правило, конструкция водяной бани выполнена из прочного материала, способного противостоять воздействию внешних рабочих факторов.

Методика расправления

Подготовленный на микротоме образец аккуратно переносится на поверхность заранее нагретой до необходимого уровня воды. Как уже сказано выше, вода в емкости бани сохраняет требуемую температуру в течение необходимого времени. Поэтому отвлекаться на регулировку водонагревательного процесса и создание нужных условий для расправления среза не придется. Все просто. При помощи удобной панели управления программируется необходимый температурный режим и фиксируется. Все данные сохраняются в резервной памяти, что значительно снижает риск ошибок.

После того, как срез достаточно расправился, необходимо при помощи предметного стекла извлечь его и приблизить к поверхности. Далее, при помощи специального инструмента образцу придается требуемый вид. Затем предметное стекло с гистологическим материалом отправляется на сушку.

Методика влажного наклеивания

При использовании этого метода исключается емкость с водой. Для расправления среза применяется стекло, на которое предварительно нанесено несколько капель дистиллированной воды. Сверху размещаются образцы. Таким образом, снова удается получить плавающие срезы.

Стекло с материалом нагревается при помощи обычной спиртовки. Интенсивность нагревания регулируется в зависимости от степени расправления срезов. Необходимо достичь полного расправления образцов, но, при этом, важно не допустить перегревания. Перегретый парафин способен стать причиной порчи образца. Все манипуляции, выполненные ранее, в таком варианте окажутся напрасными. Стоит отметить, что температура стекла при пробе тыльной стороной ладони не должна вызывать неприятных ощущений и провоцировать ожогов. Именно такой уровень нагревания оптимален для расправления срезов при влажной методике.

Сухая методика расправления

При использовании этого метода берется предметное стекло и образец. Последний аккуратно накладывается на поверхность стекла и тщательно разравнивается при помощи кисточки. После того как эта манипуляция завершена необходимо стекло быстро прогреть на спиртовке. Для выполнения расправления образцов с использованием этой методики требуется сноровка. Перегревание предметного стекла с образцом приводит к порче среза. Также стоит указать, что эта методика не применима в тех случаях, когда требуется обработать тончайшие срезы. Нежные ткани легко повреждаются и плохо поддаются расправлению. В итоге вместо необходимого образца можно получить массу потраченного впустую времени и отрицательный результат.

Не нашли подходящую информацию? Не беда! Воспользуйтесь поиском на сайте в верхнем правом углу.